Puedo decir que se lograron exitosamente los objetivos, en lo perosonal la metria de biologia molecular, durante ente semestre, me es una de la materias más complicadas, pero en la cual me he esforzado un poco más por su dificultad, esta materia más que de memorizar requiere de comprensión y entendimiento. Durante esta unidad aprendí a extraer ADN de un organismo, el cual extraer ADN nos permite conocer muchas cosas como: pruebas de paternidad, pruebas en el área criminalista (violación asecinato) o identificación de indivivuos como lo es por medio de la huella genética. aprendí como se dan los procesos de replicación en organismo eucarioticos y procarioticos, así como las enzimas que intervienen en dichos procesos. El conocer el proceso de replicación invitro del ADN también fué importante aprenderlo por que es uno de los procesos que más impacto han tenido en la actualidad en la Biología Molecular.
jueves, 22 de marzo de 2012
4.4.1 SECUENCIACIÓN DEL ADN
La secuenciación de ADN es un conjunto de métodos y técnicas bioquímicas cuya finalidad es la determinación del orden de los nucleótidos (A, C, G y T) en un oligonucleótido de ADN. La secuencia de ADN constituye la información genética heredable del núcleo celular, los plásmidos, la mitocondria y cloroplastos (En plantas) que forman la base de los programas de desarrollo de los seres vivos.
Así pues, determinar la secuencia de ADN es útil en el estudio de la investigación básica de los procesos biológicos fundamentales, así como en campos aplicados, como la investigación forense. El desarrollo de la secuenciación del ADN ha acelerado significativamente la investigación y los descubrimientos en biología. Las técnicas actuales permiten realizar esta secuenciación a gran velocidad, lo cual ha sido de gran importancia para proyectos de secuenciación a gran escala como el Proyecto Genoma Humano. Otros proyectos relacionados, en ocasiones fruto de la colaboración de científicos a escala mundial, han establecido la secuencia completa de ADN de muchos genomas de animales, plantas y microorganismos.
En el método químico un fragmento de DNA se marca en uno de sus extremos con P o S radiactivo por acción de la enzima polinucleótido quinasa. Ambos extremos se separan por la acción de una enzima de restriccion. El paso siguiente consiste en romper estos fragmentos, no más de una o dos veces por molécula, con reacciones químicas específicas para cada una de las cuatro bases. Haremos cuatro alícuotas y trataremos cada una de ellas con un compuesto químico que modifique una de las cuatro bases, aproximadamente una vez por molécula de DNA. El tratamiento posterior con piperidina producirá la rotura de la cadena allí donde la base había sido alterada.
Especificidad
Base Reactivo
G Dimetil sulfoxido
G+A Acido fórmico
T Permanganato Potásico
C Hidroxilamina
Posteriormente se analizan los fragmentos en geles desnaturalizantes.
En algunos casos especiales, las letras seguidas de A, T, C, y G se presentan en una secuencia. Esas letras representan ambiguedad. De todas las moléculas muestreadas, hay más de una clase de nucleótidos en esa posición. Las reglas de la Unión Internacional de Química Pura y Aplicada (IUPAC) son las que siguen:
La PCR, es una técnica que copia ADN y que de una salo copia puede duplicar más de 10000 compias.
para llevar acabo la técnica de replicación del ADN (PCR) es necesario contar con:
*Muestra de ADN
*Polimerasa (enzima)
*Buffer
*Termociclador
*tubitos de PCR
La PCR se ha convertido en una herramienta fundamental en campos diversos, como: la investigación (clonado de genes, detección de clones recombinantes, estudio de DNA de fósiles) medicina forense y criminalista (purebas de paternidad, identificación de individuos, violación etc.)
La PCR, se realiza con un aparato llamado termociclador, es una maquina que cam¿lienta y enfría la reacción en periodos cortos de tiempo.
El rpoceso consiste en 3 pasos que se repiten 25 veces por lo general.
1.- DESNATURALIZACIÓN
Consiste en separar la doble hebra de ADN y conviertirla en una hebra simple o sencilla.
T´picamente se usa una temperatura de 95° de 15 a 40 seg.
2.- APAREAMIENTO O ANNELING
Los cebadores primers reaccionan con una hebra cencilla de ADN y se pegan en lugares específicos por complementariedad de bases.
Para esto se baja la temperatura por ejemplo: 55° por 30 seg.
3.- POLIMERIZACIÓN O EXTENSIÓN
Una polimerasa de ADN extiende los primers en el espacio comprendido entre ambos primers, y coloca nucleotidos trifosfatados (dNTAs) de 5´a 3´de esta forma se sintetiza la secuencia de ADN molde.
Se efectua a 70°c por 1/1/2 min (varía según sea necesario)
* Los pasos 1 y 2 se repiten segun sean necesarios
* La sinstesis de DNA (paso 3) está catalizada por polimerasa termoestable (todavia presente)
* Repetición desde el paso 1 al 3.
El ácido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN (y también DNA, del inglés deoxyribonucleic acid), es un tipo de ácido nucleico, una macromolécula que forma parte de todas las células. Contiene la información genética usada en el desarrollo y el funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de algunos virus, y es responsable de su transmisión hereditaria. El ADN lo aisló por primera vez, durante el invierno de 1869, el médico suizo Friedrich Miescher mientras trabajaba en la Universidad de Tubinga. Miescher realizaba experimentos acerca de la composición química del pus de vendas quirúrgicas desechadas cuando notó un precipitado de una sustancia desconocida que caracterizó químicamente más tarde.[1] [2] Lo llamó nucleína, debido a que lo había extraído a partir de núcleos celulares.[3] Se necesitaron casi 70 años de investigación para poder identificar los componentes y la estructura de los ácidos nucleicos.
ABSTRAC
Deoxyribonucleicacid, oftenabbreviated asDNA (andalsoDNA, from Englishdeoxyribonucleic acid) isonetype of nucleic acid, a macromoleculethat forms part ofall cells.It containsthe genetic informationused in the developmentand functioningof living organismsandsome virusesknown,and is responsible forhisinheritance. The DNAwas first isolateditin the winterof1869,the Swiss physicianFriedrichMiescherwhile workingat the University ofTubingen.Miescherperformedexperiments on thechemical composition of thepusofdiscardedsurgicalbandageswhen he noticeda precipitate ofan unknown substancethatchemicallycharacterizedlater.[1] [2]He called itnuclein,becausehe hadextracted fromcell nuclei.[3]It tookalmost70 years ofresearch toidentify the componentsand structure ofnucleicacids.
INDICE:
Antecedentes
Definición del problema.
Objetivo General
Objetivos Específicos
Justificación.
Fundamento teórico
Materiales y Métodos.
Resultados.
Conclusiones y Recomendaciones.
Fuentes consultadas
Anexos.
ANTECEDENTES:
Además del agua, los carbohidratos, las proteínas y los lípidos, los seres vivos están constituidos por otras moléculas que, en menos cantidad, desempeñan funciones muy importantes.
Los ácidos nucleícos (DNA y RNA) Son biomoleculas solubles en agua que desempeñan funciones diversas. Son moléculas complejas producidas por las células vivas; son esenciales para todos los organismos vivos. Estas moléculas gobiernan el desarrollo del cuerpo y sus características específicas, ya que proporcionan la información hereditaria y ponen en funcionamiento la producción de proteínas.
La extracción de ADN de los tejidos de las plantas, a diferencia de aislamiento de ADN de tejidos de mamíferos, sigue siendo difícil debido a la presencia de una pared celular rígida que rodea las células vegetales. Actualmente se utilizan métodos exigen necesariamente una laboriosa trituración mecánica paso, necesario para interrumpir la pared celular para la liberación de ADN. El campo de labiología molecularde plantas es, por lo tanto, en una situación de desventaja, especialmente cuando un sistema automatizado de alto rendimiento para el sistema de aislamiento de PCR-Ready se requiere el ADN genómico en lagenéticade poblaciones, la identificación de las especies, la diversidadbiológicade investigación, la selección de detección, de control de los alimentos y labiotecnologíavegetal. QIAGEN GmbH ha desarrollado un 96-así moler método (MagAttract 96 Planta kit), pero se requiere de un molino mezclador especial, un paso centrifugación y, en consecuencia, no está plenamente automatable
DEFINICION DEL PROBLEMA
En la actualidad existen biologos, que no tienen el suficiente conocimiento como para desarrollarse en la materia de Biologia molecular, escencialmente en el aprendizaje de la extracción del ADN de diferentes microorganismos, el llevar acabo extracción de ADN, nos premite obtener conocimienteos de diferentes sucesos que acontencen en la actualidad como: pruebas de paternidad, o es muy util en el área criminilista para determinar veredictos de violación, asecinato entre otras.
OBJETIVO GENERAL:
Extraer DNA y RNA de tejidos animales o vegetales e identificarlos como tales.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
Utilizar técnicas sencillas que nos faciliten llevar acabo la extracción del ADN de un organismo
Observar la estructura del ADN despes de la extracción.
JUSTIFICACIÓN:
Esta práctica se llevó a acabo con el fin de proporcionarnos un conocimiento más amplio y más claro acerca de la replicación del ADN, así como su forma y estructura al llevar acabo su extracción de un organismo natural, como biologos, es necesario aprender a realizar estas practicas para un mejor desarrollo académico a lo largo de nuestra carrera.
FUNDAMENTO TEORICO
La práctica de extracción de ADN, la relaizamos mdiante un manual de prácticas que nos proporcionó el profesor de la materia, haciendo equipos de 5 personas para un mejor aprendizaje. Así que la practica se realizó de la siguiente manera:
A) Rompimiento de membranas y pared celulares.
Toma una muestra del tejido (5 gr Aprox) que hayas eligido y homogenízalo, es decir muelelo con el mortero, si el tejido es muy duro, si el tejido es muy duro licualo en seco.
B) Digestion
Coloca tu muestra molida (1 gr aprox), en un tubo de eppendorf de 1 ml y agrégale el Buffer de extracion (Tris- HCL 0.05 M, EDTA, 0,02 M, NaCl 0.35 M, Urea 7 M) a temperatura de cuarto (500 ul aprox).
Cuando hayas agregado el Buffer de extracción a tu muestra, agítala e incúbala por 10 minutos con agitación esporádica.
C) Separación de Proteínas, Carbohidratos y Lípidos
A la mezcla que tienes en tu tubo de ensayo agrégale 500 ul. de Fenol/Cloroformo/Isopropanol frio usa guantes y no inhales los vapores.
Agita vigorosamente en Vortex, cuidando que no se tire el contenido del tubo, deja reposar a temperatura ambiente por 5 min.
Extrae la fase acuosa (500 ul.) con una micropipeta, si no se separan las fases centrifuga a 3000 rpm por 10 min, ten cuidado de equilibrar la centrifuga.
Extrae la fase acuosa superior una vez centrifugada.
D) Precipitación de Ácidos nucleicos DNA y RNA
A la fase acuosa que extrae (500 ul), colocala en un tubo de eppendorf limpio y agrégale 400 ul de etanol (100 %) frio y 75 ul de NaCl 3 M. Mezcla por inversión, suave y observa como se precipita el DNA.
D) Recuperacion de la pastilla.
Centrifuga tu tubo por 5 min a 3000 rpm, recoge la pastilla del fondo del tubo.
E) Resuspension.
Resuspende tu pastilla de DNA en 5 ml de agua destilada estéril.
MATERIALES Y MÉTODOS.
MATERIAL:
Tubos de centrifuga
Tubos de ensayo de 5ml
Centrifuga
Micropipetas de 1000 y 200 ul
Agua destilada esteril (20 ml para todos)
Etanol al 100% frio 20 ml
NaCl 3M
Buffer de extraccion de ADN (Urea, NaCl, EDTA, 20 ml)
Fenol/cloroformo/isopropanol frio 20 ml.
Mortero y pistilo
Higado de res
Papel aluminio
CleenpacK
Guantes
METODO: El método qu utilizamos fue, basarnos y guiarnos en el manual de práctica que nos proporcionó el profesor de la Materia.
RESULTADOS
A) Rompimiento de membranas y paredes celulares
Toma una muestra del tejido de higado (5 gr. aproximadamente) y muelelo con el mortero.
B) Digestion
Coloca tu muestra molida (1 gr aprox), en un tubo de eppendorf de 1 ml y agrégale el Buffer de extracion (Tris- HCL 0.05 M, EDTA, 0,02 M, NaCl 0.35 M, Urea 7 M) a temperatura de cuarto (500 ul aprox).
Cuando hayas agregado el Buffer de extracción a tu muestra, agítala e incúbala por 10 minutos con agitación esporádica
C) Separación de Proteínas, Carbohidratos y Lípidos
A la mezcla que tienes en tu tubo de ensayo agrégale 500 ul. de Fenol/Cloroformo/Isopropanol frio usa guantes y no inhales los vapores.
Agita vigorosamente en Vortex, cuidando que no se tire el contenido del tubo, deja reposar a temperatura ambiente por 5 min.
Extrae la fase acuosa (500 ul.) con una micropipeta, si no se separan las fases centrifuga a 3000 rpm por 10 min, ten cuidado de equilibrar la centrifuga.
Extrae la fase acuosa superior una vez centrifugada.
D) Precipitación de Ácidos nucleicos DNA y RNA
A la fase acuosa que extrae (500 ul), colocala en un tubo de eppendorf limpio y agrégale 400 ul de etanol (100 %) frio y 75 ul de NaCl 3 M. Mezcla por inversión, suave y observa como se precipita el DNA.
D) Recuperacion de la pastilla.
Centrifuga tu tubo por 5 min a 3000 rpm, recoge la pastilla del fondo del tubo.
E) Resuspension.
Resuspende tu pastilla de DNA en 5 ml de agua destilada estéril.
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:
El llevar acabo esta práctica, nos proporcionó el conocimiento necesario para que como unos buenos biologos, sepámos llevar acabo extracción de ADN de cualquier organismo Natural, en la actualidad la biologia molecular se ha disparado con gran potencia gracias a sus importantes aportaciones a la vida humana, el aprender a extraer ADN, nos puede ayudar a conocer o a comprobar pruebas de paternidad, así como crímenes de asecinato y vilación, una de sus grandes aportaciones es la huella genética, que nos identifica como humanos y atraves de procesos desarrollados por la biología molecular poedemos obtener resultados de identificación en cualquier suceso.
El proceso resultante de la duplicación de ADN se conoce como división celular, la cual se ha estudiado a nivel citológico estableciéndose ciertas pautas cubiertas por lo que se conoce como ciclo celular.
La mayor parte de los estudios de ciclo celular se han llevado a cabo empleando S. cerevisiae, la levadura del pan y la cerveza también conocida como la levadura de gemación por su característico estilo de división. En el caso de este organismo hay que añadir la ventaja de que actualmente se conocen los aproximadamente 16 millones de pares de nucleótidos que constituyen la secuencia completa de su genoma.
Las células de los distintos organismos pasan durante su vida por distintos períodos, cada uno de ellos característico y claramente diferenciado.
Cada tipo celular cumple con sus funciones específicas durante la mayor parte de su vida, creciendo gracias a la asimilación de materiales provenientes de su ambiente y con ellos sintetiza nuevas moléculas por medio de complejos procesos regulados por su material genético.
Cuando una célula aumenta hasta llegar a un determinado tamaño, su eficiencia metabólica se torna crítica, entonces se divide. En los organismos pluricelulares, se produce un crecimiento a partir de una célula (huevo o cigoto) como así también se aumenta la masa tisular y se reparan los tejidos lesionados o desgastados, por aumento del número de células.
Las nuevas células originadas en esta división poseen una estructura y función similares a las células progenitoras, o bien derivadas de ellas.
La replicación del ADN en procariotas es muy sumilar, a la replicación del ADN en procariotas pero es un poco más complejo.
EL DNA en eucariontes se organiza en varios cromosomas lineales, y este es mas largo.
EL movimiento del DNA polimerasa es mucho más lento, y esto permite que se forme un numero mayor de horquillas de replicación.
También se forman fragmentos de okazaki pero mas pequeños.
Y el final de la replicación tiene que resolver el problema del acortamiento de los cromosomas, para ello ha desarrollado la estructura de los telómeros y telosomas, y la actuación de una nueva enzima llamada Teloromesara.
*Es similar a la de los procariontes, es decir, semiconservativa y bidireccional. Existe una hebra conductora y una hebra retrasada con fragmentos de Okazaki. Se inicia en ORI (puede haber unas 100 a la vez), entre las diferencia, se comienza con las polimerasas, son más complejas, y además, la polimerasa de la hebra continua es diferente a la de la hebra discontinua. De la hebra continua se encarga la polimerasa Delta y de la discontinua, la Alfa.
*Las helicasa difieren en estructura, las primasas se encuentran adosadas a la ADN-pol Alfa.
*El resto del proceso es muy parecido.
*En el final de la hebra antigua que da la base a la hebra discontinua, queda una zona denominada telómero, que no tiene como obtener su dupla en la hebra discontinua, debido a que no es posible insertar un nuevo ARN cebador, ni mucho menos un fragmento de Okazaki. Al no tener su par, son eliminados automáticamente, perdiendose. Existen enzimas, las telomerasas, que repiten esta secuencia varias veces, cosa que no se pierda información esencial del genoma. Las enzimas encargadas de cortar el telómero, son las topoisomerasas 4.
*El ARN cebador es retirado por el complejo de reparación de la célula.
DIFERENCIAS ENTRE REPLICACIÓN EN EUCARIOTES Y PROCARIOTES
PROCARIONTES
EUCARIONTES
Presentan un solo origen de replicación
Tienen múltiples orígenes de replicación
Presentan una sola burbuja de replicación
Tienen varias burbujas de replicación
El movimiento del ADN polimerasa es más rápido
El movimiento del ADN es 10 veces más lento
La replicación es más lenta
Su replicación es más rápida
Fragmentos de Okazaki largos
Sus fragmentos de okazaki más cortos
Cuentas con mecanismos que le proporcionan, velocidad y fidelidad, para evitar errores
La replicación del ADN en procariotas comienxa con la apertura de la doble cadena de adn, con la intervención de una enzima llamada helicasa usando ATP, esto es necesario para que ambas cadenas sean utilizadas como moldes en la sintesis, las SSBP proteínas de unión de la cadena simple de ADN evitan que las mismas se vuelvan a enrrollar, en la cadena molde de dirección 3´ 5´ la ADN polimerasa puede agregar nuleotidos en dirección 5´3´sin inconvenientes, sin embargo la hebra molde de dirección 3´5´ no puede replicarse en forma continua por eso se le llama retardada, esto es por que la polimerasa sintetiza en sentido contrario 5´3´es necesario que se habra la horquilla para empezar a replicarse a partir de los primers que sintetiza una primasa, a partir de ellos la ADN polimerasa 3 sintetiza gragmentos de ADN denominados de okazaki, hatasta encontrarse con el primer de ARN siguiente, luego la pilimerasa 1 emueve el primer de ARN Y agrega ADN en su reemplazo, el eje de azucar fosfato y luego cellado por una ligasa.
DNA polimerasas procariotas
Las DNA polimerasas I, II y III se encuentran en las procariontes.
La DNA polimerasa I de E. coli: Es una sola cadena polipeptídica de Mr 109 000. Contiene un átomo de zinc por molécula. Cataliza la polimerización en el sentido 5´a 3´.
LA DNA polimerasa III de E. coli: Esta formada por 7 subunidades: a, b, g, d, e, q y t. Las siete son escenciales para la actividad máxima.
La DNA pol. III: Es la principal enzima de replicación en E. coli. La DNA pol. I es responsable de la reparación de DNA dañado. La funcion de la DNA pol II no esta todavía clara.
Meselson y Stahl prueban que el modelo semiconservativo de la replicación del ADN es correcto.
El experimento de Meselson-Stahl fue un experimento realizado en 1957 por Matthew Meselson y Franklin Stahl en el que se demostró que la replicación de ADN era
SEMICONSERVADORA.
Las bacterias crecen en el medio 14N o 15N.
Muestras removidas y el ADN extraído.
Centrifugue las muestras de ADN haciendo click en los tubos de muestra de ADN de abajo.
Descripción del experimento Meselson y Stahl
Meselson y Stahl probaron la hipótesis de la replicación del ADN. Ellos cultivaron bacterias en un medio 15N. El 15N es un isótopo pesado de nitrógeno, por lo tanto el ADN sintetizado es de densidad pesada. Etonces ellos cambiaron las bacterias al medio 14N. El ADN se aisló diferentes veces que corresponden a los ciclos se replicación 0, 1, y 2. Después de un ciclo de replicación, el ADN fue todo de densidad intermedia. Esto descarta el modelo conservador de la replicación, que predice que ambos ADN (pesado y liviano) estarán presentes, pero ninguno de densidad intermedia estará presente.
Este resultado es consistente con el modelo semiconservativo de replicación, que predice que todas las moléculas de ADN consistirán de una cadena 15N de ADN y una cadena 14N de ADN.
El resultado no descarta el modelo dispersivo de replicación, que también predice que todo el ADN será de densidad intermedia, consistiendo de segmentos intercalados de doble cadena 15N y 14N.
Después de dos ciclos de replicación, se ven dos bandas de ADN, una de densidad intermedia y una de densidad liviana. Este resultado es exactamente lo que el modelo semiconservativo predice: la mitad debería ser densidad intermedia 15N-14N la intermedia y la mitad de densidad liviana 14N-14N.
Este resultado descarta el modelo dispersivo de la replicación, que predice que después del ciclo 1 de replicación, la densidad del todas las moléculas de ADN, gradualmente llegarían a ser más bajas. Por lo tanto, ningún ADN de densidad intermedia intermedio debería permanecer después del ciclo 2. El modelo semiconservativo es correcto.
El proceso de replicación de ADN es el mecanismo que permite al ADN duplicarse (es decir, sintetizar una copia idéntica). De esta manera de una molécula de ADN única, se obtienen dos o más "clones" de la primera. Esta duplicación del material genético se produce de acuerdo con un mecanismo semiconservativo, lo que indica que las dos cadenas complementarias del ADN original, al separarse, sirven de molde cada una para la síntesis de una nueva cadena complementaria de la cadena molde, de forma que cada nueva doble hélice contiene una de las cadenas del ADN original. Gracias a la complementacion entre las bases que forman la secuencia de cada una de las cadenas, el ADN tiene la importante propiedad de reproducirse idénticamente, lo que permite que la información genética se
transmita de una célula madre a las células hijas y es la base de la herencia del material genético.
La molécula de ADN se abre como una cremallera por ruptura de los puentes de hidrogeno entre las bases complementarias liberándose dos hebras y la ADN polimerasa sintetiza la mitad complementaria añadiendo nucleótidos que se encuentran dispersos en el núcleo. De esta forma, cada nueva molécula es idéntica a la molécula de ADN inicial.
La replicación empieza en puntos determinados: los orígenes de replicación. Las proteínas iniciadoras reconocen secuencias de nucleótidos específicas en esos puntos y facilitan la fijación de otras proteínas que permitirán la separación de las dos hebras de ADN formándose una horquilla de replicación. Un gran número de enzimas y proteínas intervienen en el mecanismo molecular de la replicación, formando el llamado complejo de replicación o replisoma. Estas proteínas y enzimas son homólogas en eucariotas y arqueas, pero difieren en bacterias.
CARACTERISTICAS:
· Es un proceso semiconservativo, donde cada cadena hija está formada por una parental y otra de nueva síntesis. Meselson y Stahl, fueron los primeros que confirmaron experimentalmente el modelo.
· La replicación es un proceso bidireccional. Avanza en los dos sentidos con dos horquillas de replicación. Podemos observar esta evidencia mediante el uso de timina tritiada.
El movimiento de la horquilla es bidireccional en la mayoría de los casos, es decir, a partir de un punto se sintetizan las dos cadenas en ambos sentidos. Esto ocurre en la mayoría de los organismos, pero se dan excepciones en algunos procariontes debido a que los mecanismos de replicación que tienen lugar dependen de la propia estructura de su material hereditario (si el ADN es circular, lineal, bicatenario o monocatenario).
· Además, es un proceso semidiscontinuo, pues una de las cadenas se sintetiza de forma continua (cadena líder), mientras que la otra se sintetiza discontinuamente; son los fragmentos de okazaki.
· Una serie de actividades enzimáticas entre las cuales destaca la polimerasa, actividad que necesita la presencia de cebadores de RNA.
· Presencia de cebadores de RNA, factor muy importante, pues son necesarios para comenzar la elongación de las cadenas hijas.
La replicación tiene lugar gracias a la existencia de actividades enzimáticas, tales como la DNA POLIMERASA, que permiten la elongación de las cadenas hijas y ponen el cebador inicial que permite el inicio de la elongación de las cadenas hijas.
EN GENERAL:
La helicasa Rompe los puentes de hindrógeno de la doble hélice permitiendo el avance de la horquilla de replicación.
La topoisomerasa impide que elADN se enrede debido al superenrollamiento producido por la separación de la doble hélice.
Las proteínas SSB se unen la hebra discontínua de ADN, impidiendo que ésta se una consigo misma.
La ADN polimerasa sintetiza la cadena complementaria de forma continua en la hebra adelantada y de forma discontínua en la hebra rezagada.
La ARN primasa intetiza el cebador de ARN necesario para la síntesis de la cadena complementaria a la cadena rezagada.
La ADN ligasa une los fragmentos de Okazaki.
El proceso se puede Dvidir en 3 fases: iniciación, elongación y terminación.
El cebador: son pequeñas unidades de RNA que se unen a los fragmentos para que la ADN polimerasa reconozca donde debe unirse.
Los cebadores los quita la pol. I y coloca bases a la cadena en crecimiento por la ligasa.
