viernes, 12 de abril de 2013



INSTITUTO TECNOLOGICO DE CD. ALTAMIRANO
ASIGNATURA: BIOTECNOLOGIA
TAREA 5 : RESUMEN DE LA UNIDAD 2°
QUIEN PRESENTA:
ALUMNA: YANITZI PALOMA CERVANTES SANTIBAÑEZ
NUMERO DE CONTROL: 09930033
CARRERA: LIC. EN BIOLOGIA VIII SEMESTRE
 
 
 
2.1 MEDIOS DE CULTIVO

 

El cultivo de tejidos, como técnica, consiste esencialmente en aislar una porción de planta (explante) y proporcionarle artificialmente las condiciones físicas y químicas apropiadas para que las células expresen su potencial intrínseco o inducido. Es necesario adoptar procedimientos de asepsia para mantener los cultivos libres de contaminación microbiana.

 

Existen distintos tipos de medios, Sin embargo, existen medios mas frecuentemente utilizados como son:

1.-El medio murashige

2.- Skoog (MS)

3.-White,

4.- Gamborg et al (B5).

5.- El medio Knudson para orquídeas etc.

Algunos  medios resultan bastante sencillos como el Knudson, el cual contiene sólo 4 componentes y no incluye  microelementos  ya que se supone que se encuentran como impurezas en los otros componentes.

En cultivos de frutales y hortalizas el medio más utilizado es MS (publicado en 1962 y considerado uno de los mayores aportes al cultivo de tejidos)

 


 

 

 
2.1.1 AREAS DEL LABORATORIO DEL CULTIVO DE TEJIDOS

 

Dentro de un laboratorio de cultivo de tejidos, se encuentran varias áreas de trabajo divididas esquemáticamente para desarrollar las diferentes funciones, prácticas o trabajos.

 
Las áreas o secciones principales son:
 


 




    2.1.2 MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO

 

Suponiendo que se establecerá un laboratorio de cultivo de tejidos de tamaño medio, se requieren, para ponerlo en funcionamiento, las siguientes piezas de equipo estándar:
 




 




 

2.1.3 GENERALIDADES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO


 

Un medio de cultivo se puede determinar, como solución o formulación químicamente definida, donde un explante encuentra las condiciones adecuadas para desarrollar su potencial intrínseco. Las células vegetales requieren gran variedad de nutrimientos orgánicos e inorgánicos, para desarrollarse, ambos nutrimentos se requieren en dos niveles: uno macro y otro micro. El primer objetivo en la preparación de un medio de cultivo es suministrar los nutrimentos minerales en concentraciones adecuadas. Se debe incluir macro elementos ( C, H, O, P, K, N, S, Ca Y Mg ) y los microelementos ( B, Zn, Mn, Cu, Mo, Fe, Cl ).

 

Los medios de cultivo constituyen un elemento fundamental para el cultivo “in vitro” de células, tejidos, protoplastos, anteras y para lograr el desarrollo de embriones y lograr la micropropagación, etc. Los medios de cultivo tienen una serie de componentes generales y específicos cuya presencia y concentración estará en dependencia del objetivo que se persiga en su utilización. Así, los medios de cultivo pueden ser líquidos o tener un soporte sólido, tienen sustancias minerales, vitaminas, aminoácidos, azúcares, fitohormonas, etc
 
 
COMPUESTOS ORGANICOS
 
 
 

 
 
2.1.4 COMPONENTES DEL MEDIO DE CULTIVO
El medio de cultivo debe tener los nutrientes necesarios para que las células vegetales puedan desarrollarse con normalidad, entre sus componentes encontramos:
SALES INORGÁNICAS
Macronutrientes
Los elementos minerales son muy importantes para la vida de las plantas.
 


 

Micronutrientes

 Estos micronutrientes son importantes en las células vegetales, ya que al adicionarles ciertas cantidades excesivamente pequeñas permite que las sales madres sean mas eficaz para el medio de cultivo.
 
 
FUENTES DE CARBONO
Normalmente para el cultivo in vitro de células, tejidos u órganos es necesario adicionar una fuente de carbono en el medio, debido a que el crecimiento in vitro tiene lugar en condiciones poco apropiadas para la fotosíntesis o incluso en oscuridad.
La sacarosa es la más utilizada para propósitos de Micropropagacion.
Generalmente se usan concentraciones de 1 -6% de sacarosa en el medio, aquí es convertida rápidamente en glucosa y fructosa; la glucosa es la que primero se utiliza seguida de la fructosa. El azúcar blanco refinado que se vende en los supermercados puede resultar adecuado para la Micropropagación en muchos casos.
 Los azucares en el medio cumplen dos funciones esenciales:
1.-Son fuentes de energía.
2.-Mantienen en el medio un potencial osmótico determinado.
 
VITAMINAS
La mayor parte de las plantas sintetizan casi todas las vitaminas esenciales, pero aparentemente lo hacen en cantidades infraóptimas. Para lograr un buen crecimiento es necesario a menudo suplir al medio con una o más vitaminas.
La tiamina (B1) es la que más se utiliza y se la considera un ingrediente esencial. Otras vitaminas también han demostrado tener un efecto positivo en el crecimiento in vitro, como son: pidiroxina (B6), ácido nicotínico (B3), pantotenato cálcico (B5).
 
AMINOÁCIDOS
 
Los aminoácidos son usados como constituyentes de compuestos de composición química indefinida o bien por adición directa. De esta manera, se encuentran en caseína hidrolizada, peptona, triptona, lactoalbúmina hidrolizada, extracto de malta, agua de coco, casamina, etc. Los aminoácidos que se emplean directa y más comúnmente son L-glicina, L-glutamina, L-asparagina, L-arginina, L-prolina, ácido glutámico. L-hidroxiprolina, L-alanina, L-lisina, L-leucina, L-serina y L-cisteina.
 
Nitsch y Nitsch (1957) señalan que las formas L de los aminoácidos son más adecuadas para el cultivo de tejidos que las formas -D ya que estas son tóxicas.
 
REGULADORES DE CRECIMIENTO
 
Adicionalmente a los nutrientes, generalmente es necesario agregar una o más sustancias reguladoras; frecuentemente Auxinas y/o Citoquininas, pero a veces también Giberelinas o ácido ascórbico, para mejorar el desarrollo del cultivo in vitro de tejidos y órganos. Por otro lado, los requerimientos de estas sustancias varían considerablemente con los tipos de tejidos y los niveles endógenos de estos reguladores, así como con la finalidad del cultivo in vitro.
 El uso de fitoreguladores en los cultivos in vitro es de gran importancia por cuanto Se ha demostrado que la clase y concentración de dichas sustancias interactúan con el genoma de la planta. (Montoya, 1991)
 
· Auxinas
 Son utilizadas principalmente para la diferenciación de raíces y la inducción de callo. Las más utilizadas son:
 
IBA: (ácido indol-3-butírico) = diferenciación de raíces
ANA: (ácido naftalenacético) = diferenciación de raíces
IAA: (ácido indolacético) = Prolongación de explantes
2,4-D: (ácido diclorofenoxiacético) = inducción de callos.
 
· Citoquininas
 Promueve la división celular y la inducción de yemas adventicias en callos y órganos. Brotación.
— Las Citoquininas más usadas son:
— BAP: (bencilamino purina)
— Kinetina
— 2-ip (isopentenil-adenina).
(Generalmente son diluidas con ácido clorhídrico o hidróxido de sodio).
 
· Giberelinas
 Su función principal es alargar las regiones subapicales del explante. La giberelina con mayor uso es: El GA3: pero se debe tener en cuenta que es muy sensible al calor (pierde el 90% de su actividad después del autoclavado)
 
Comparado con las Auxinas y Citoquininas, las giberelinas se utilizan raramente. La mayoría de los explantes sintetizan cantidades suficientes de este grupo de hormonas.
 
· Acido abscísico
El ácido abscísico (ABA) en la mayor parte de los casos produce un efecto negativo en los cultivos in vitro, pero en determinados casos promueve la maduración de embriones, y en cultivos de células en suspensión facilita la sincronización de la división celular.
 
AGAR
 El agar es un gel que se extrae de algas marinas y que por sus características físicas se emplea para solidificar el medio básico, cuando ses trabaja con cultivo estsacionario sólido o semi-sólido.

AGUA
Es el elementos indispensable ya que se utiliza para aforar al volumen que se requiera.