INSTITUTO TECNOLOGICO DE CD. ALTAMIRANO
ASIGNATURA: BIOTECNOLOGIA
TAREA 5 : RESUMEN DE LA UNIDAD 2°
QUIEN PRESENTA:
ALUMNA: YANITZI PALOMA CERVANTES SANTIBAÑEZ
NUMERO DE CONTROL: 09930033
CARRERA: LIC. EN BIOLOGIA VIII SEMESTRE
2.1 MEDIOS DE CULTIVO
El cultivo
de tejidos, como técnica, consiste esencialmente en aislar una porción de
planta (explante) y proporcionarle artificialmente las condiciones físicas y
químicas apropiadas para que las células expresen su potencial intrínseco o
inducido. Es necesario adoptar procedimientos de asepsia para mantener los
cultivos libres de contaminación microbiana.
Existen distintos tipos de
medios, Sin embargo, existen medios mas frecuentemente utilizados como son:
1.-El medio murashige
2.- Skoog (MS)
3.-White,
4.- Gamborg et al (B5).
5.- El medio Knudson para
orquídeas etc.
Algunos medios resultan bastante sencillos como el
Knudson, el cual contiene sólo 4 componentes y no incluye microelementos ya que se supone que se encuentran como impurezas
en los otros componentes.
En cultivos de frutales y
hortalizas el medio más utilizado es MS (publicado en 1962 y considerado uno de
los mayores aportes al cultivo de tejidos)
Dentro de un laboratorio de
cultivo de tejidos, se encuentran varias áreas de trabajo divididas
esquemáticamente para desarrollar las diferentes funciones, prácticas o
trabajos.
Las áreas o
secciones principales son:
2.1.2 MATERIAL Y EQUIPO
DE LABORATORIO
Suponiendo
que se establecerá un laboratorio de cultivo de tejidos de tamaño medio, se
requieren, para ponerlo en funcionamiento, las siguientes piezas de equipo
estándar:
2.1.3 GENERALIDADES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de
cultivo se puede determinar, como solución o formulación químicamente definida,
donde un explante encuentra las condiciones adecuadas para desarrollar su
potencial intrínseco. Las células
vegetales requieren gran variedad de nutrimientos orgánicos e inorgánicos, para
desarrollarse, ambos nutrimentos se requieren en dos niveles: uno macro y otro
micro. El primer objetivo en la preparación de un medio de cultivo es
suministrar los nutrimentos minerales en concentraciones adecuadas. Se debe
incluir macro elementos ( C, H, O, P, K, N, S, Ca Y Mg ) y los microelementos (
B, Zn, Mn, Cu, Mo, Fe, Cl ).
Los medios de cultivo constituyen un elemento
fundamental para el cultivo “in vitro” de células, tejidos, protoplastos,
anteras y para lograr el desarrollo de embriones y lograr la micropropagación,
etc. Los medios de cultivo tienen una serie de componentes generales y
específicos cuya presencia y concentración estará en dependencia del objetivo
que se persiga en su utilización. Así, los medios de cultivo pueden ser
líquidos o tener un soporte sólido, tienen sustancias minerales, vitaminas,
aminoácidos, azúcares, fitohormonas, etc
COMPUESTOS ORGANICOS
2.1.4
COMPONENTES DEL MEDIO DE CULTIVO
El medio de cultivo debe tener los
nutrientes necesarios para que las células vegetales puedan desarrollarse con
normalidad, entre sus componentes encontramos:
SALES INORGÁNICAS
Macronutrientes
Los elementos minerales son muy importantes para la vida de las plantas.
Micronutrientes
FUENTES DE CARBONO
Normalmente
para el cultivo in vitro de células, tejidos u órganos es necesario adicionar
una fuente de carbono en el medio, debido a que el crecimiento in vitro tiene
lugar en condiciones poco apropiadas para la fotosíntesis o incluso en
oscuridad.
La sacarosa
es la más utilizada para propósitos de Micropropagacion.
Generalmente
se usan concentraciones de 1 -6% de sacarosa en el medio, aquí es convertida
rápidamente en glucosa y fructosa; la glucosa es la que primero se utiliza
seguida de la fructosa. El azúcar blanco refinado que se vende en los
supermercados puede resultar adecuado para la Micropropagación en muchos casos.
1.-Son
fuentes de energía.
2.-Mantienen
en el medio un potencial osmótico determinado.
VITAMINAS
La mayor
parte de las plantas sintetizan casi todas las vitaminas esenciales, pero
aparentemente lo hacen en cantidades infraóptimas. Para lograr un buen
crecimiento es necesario a menudo suplir al medio con una o más vitaminas.
La tiamina
(B1) es la que más se utiliza y se la considera un ingrediente esencial. Otras
vitaminas también han demostrado tener un efecto positivo en el crecimiento in
vitro, como son: pidiroxina (B6), ácido nicotínico (B3), pantotenato cálcico
(B5).
AMINOÁCIDOS
Los aminoácidos son usados como
constituyentes de compuestos de composición química indefinida o bien por
adición directa. De esta manera, se encuentran en caseína hidrolizada, peptona,
triptona, lactoalbúmina hidrolizada, extracto de malta, agua de coco, casamina,
etc. Los aminoácidos que se emplean directa y más comúnmente son L-glicina, L-glutamina, L-asparagina, L-arginina,
L-prolina, ácido glutámico. L-hidroxiprolina, L-alanina, L-lisina, L-leucina,
L-serina y L-cisteina.
Nitsch y Nitsch (1957) señalan que las formas L de
los aminoácidos son más adecuadas para el cultivo de tejidos que las formas -D
ya que estas son tóxicas.
REGULADORES DE CRECIMIENTO
Adicionalmente
a los nutrientes, generalmente es necesario agregar una o más sustancias
reguladoras; frecuentemente Auxinas y/o Citoquininas, pero a veces también
Giberelinas o ácido ascórbico, para mejorar el desarrollo del cultivo in vitro
de tejidos y órganos. Por otro lado, los requerimientos de estas sustancias
varían considerablemente con los tipos de tejidos y los niveles endógenos de
estos reguladores, así como con la finalidad del cultivo in vitro.
· Auxinas
IBA: (ácido
indol-3-butírico) = diferenciación de raíces
ANA: (ácido
naftalenacético) = diferenciación de raíces
IAA: (ácido
indolacético) = Prolongación de explantes
2,4-D:
(ácido diclorofenoxiacético) = inducción de callos.
· Citoquininas
— Las
Citoquininas más usadas son:
— BAP:
(bencilamino purina)
— Kinetina
— 2-ip
(isopentenil-adenina).
(Generalmente
son diluidas con ácido clorhídrico o hidróxido de sodio).
· Giberelinas
Comparado
con las Auxinas y Citoquininas, las giberelinas se utilizan raramente. La
mayoría de los explantes sintetizan cantidades suficientes de este grupo de
hormonas.
· Acido abscísico
El ácido
abscísico (ABA) en la mayor parte de los casos produce un efecto negativo en
los cultivos in vitro, pero en determinados casos promueve la maduración de
embriones, y en cultivos de células en suspensión facilita la sincronización de
la división celular.
AGAR
AGUA
Es el elementos indispensable ya que se utiliza para aforar al volumen que se
requiera.
